دانلود پاورپوینت آشنایی با روش Agroinoculation انتقال ژن

\n

عنوان قبلی : Agroinoculation

\n

\n

عنوان های پاورپوینت  : 

\n

\n

مقدمه

\n

Agrobacterium

\n

Agrobacterium

\n

سازماندهی پلازمید Ti

\n

سازماندهی پلازمید Ti

\n

سازماندهی پلازمید Ti

\n

انتقال T-DNA

\n

ناقل های مبتنی بر آگروباکتریوم

\n

دلایل عدم استفاده مستقیم از پلازمید Ti

\n

مراحل اصلاح پلازمید Ti

\n

انواع ناقل

\n

Co-integrate vectors

\n

اجزای ناقل تلفیقی (Co-integrate vectors)

\n

Binary vectors

\n

اجزای ناقل دوتایی (Binary vectors)

\n

مزایای استفاده از ناقلین دوتایی

\n

مهمترین لازمه ها برای انتقال ژن  توسط آگروباکتریوم

\n

روش های تلقیح

\n

\n

آلودگی ویروس با استفاده از آگروباکتریوم

\n

مزایا

\n

معایب

\n

منابع

\n \n\n \n\n

---

\n\nقسمت ها و تکه های اتفاقی از فایل\n\n \n\n \n\nآشنایی با روش\n\nAgroinoculation\n\nانتقال ژن\n\nAgroinoculation\n\nمقدمه\n\nانتقال ژن فرآیندی است که طی آن، قطعه مشخصی از DNA به درون سلولها وارد میشود.\n\n \n\nبه انتقال هدایت شده ژن از یک موجود زنده به موجود زنده دیگر و تلفیق و بیان پایدار آن ژن در ژنوم موجود پذیرنده، انتقال ژنتیکی ( تراژنی) گفته می شود.\n\n \n\nژن منتقل شده تراژن(Transgene)  نامیده می شود.\n\n \n\nسیستم اگروباکتریوم اولین سیستم تراریختی موفق در گیاهان می باشد (1983)\n\n \n\nغلبه بر دستکاری ژن های گیاهی با شناخت خصوصیات و بهره برداری از پلازمیدهای Ti و Ri محقق گردید\n\n \n\nاین پلازمید ها امکان انتقال طبیعی ژن، بیان ژن و سیستم های گزینش را فراهم می کنند.\n\n \n\nAgrobacterium\n\nباکتری گرم منفی، میله ای شکل\n\nمتعلق به خانواده Rhizobiaceae\n\nاغلب در نزدیکی سطح خاک (در ناحیه طوقه)\n\n \n\nAgrobacterium\n\nA. tumefaciens عامل بیماری گال طوقه و دارای پلازمید Ti\n\n \n\nA. Rhizogenes عامل بیماری ریشه موئی و دارای پلازمید Ri\n\n \n\nA. Radiobacter گونه غیر بیماریزا و بدون پلازمید\n\nبراساس خوصیات بیماریزایی و داشتن پلازمید Ti و Ri طبقه بندی قدیمی این جنس شامل\n\nسازماندهی پلازمید Ti\n\nمولکول های حلقوی بزرگ (800-200 کیلو باز)\n\n \n\nبه صورت واحد های ژنتیکی خود تکثیر در سلول های باکتریایی\n\n \n\nسازماندهی پلازمید Ti\n\nسازماندهی پلازمید Ti\n\nژن های سرطان زا جهت تومورزایی و ساخته شدن اپین ها ضروری اند\n\nانتقال T-DNA\n\nجهت انتقال T-DNA به سلول گیاه سه عامل مورد نیاز می باشد.\n\n \n\nمرز راست و چپ T-DNA\n\n \n\nژن های ناحیه vir\n\n \n\nژن های کروموزومی مانند chvA، chvB و pscA\n\nناقل های مبتنی بر آگروباکتریوم\n\nساده ترین روش برای بهره گرفتن از پلازمید Ti جهت انتقال ژن به گیاهان، وارد کردن توالی ژن مورد نظر به داخل ناحیه T-DNA و سپس استفاده از پلازمید Ti و باکتری A. tumefacience می باشد تا این توالی ژنی را وارد سلول گیاه کرده و به داخل ژنوم گیاه الحاق کند.\n\nدلایل عدم استفاده مستقیم از پلازمید Ti\n\nتولید هورمون های گیاهی توسط سلول های ترنسفورم شده در محیط کشت، که از باززایی آنها به گیاهان بالغ جلوگیری می کند.\n\nتولید اپین با استفاده از منابع گیاهی در صورت حذف نشدن ژن تولید اپین\n\nاندازه بزرگ پلازمید Ti\n\nفقدان مکان های برشی منحصر به فرد برای آنزیم های برشی\n\nعدم تکثیر پلازمید Ti در باکتری های دیگر مانند E. coli\n\n \n\nمراحل اصلاح پلازمید Ti\n\nافزودن یک ژن مارکر گزینشگر جهت اعطای مقاومت به سلول های گیاهی ترنسفورم شده\n\nافزودن یک ناحیه شروع همانند سازی (ori) به پلازمید جهت همانندسازی در E.coli\n\nحفظ توالی مرزی راست T-DNA(جهت الحاق و پیوستن T-DNA به توالی DNA سلول گیاهی لازم است)\n\nافزودن یک پلی لینکر (MCS) جهت تسهیل الحاق ژن کلون شده به ناحیه بین توالی های مرزی T-DNA\n\nانواع ناقل\n\nCo-integrate vectors\n\nاجزای ناقل تلفیقی (Co-integrate vectors)\n\nمکان های مناسب برای جا دادن ژن مورد نظر (MCS)\n\n \n\nژن یا ژن های نشانگر گزینشگر آنتی بیوتیکی فعال در E. coli و A. tumefaciens\n\n \n\nیک ژن نشانگر گزینشگر فعال در گیاه\n\n \n\nنقطه شروع همانندسازی فعال در E.coli  که در آگروباکتریوم عمل نمی کند.\n\n \n\nBinary vectors\n\nاجزای ناقل دوتایی (Binary vectors)\n\nمکان کلونینگ چند گانه (MCS)\n\n \n\nیک نقطه شروع همانند سازی با قابلیت عمل در طیف وسیعی از میزبان ها (مثل E. coli و A. tumefaciens)\n\n \n\nنشانگرهای گزینشکر برای باکتری ها و گیاهان\n\n \n\nتوالی های مرزی T-DNA (هرچند فقط توالی مرزی سمت راست مطلقا ضروری است)\n\nمزایای استفاده از ناقلین دوتایی\n\nبه پروسه های نوترکیبی در in vivo نیاز ندارند در حالیکه ناقلین تلفیقی برای ماندگاری دائم در درون نژاد آگروباکتریوم هدف، حتما به یک فرآیند نوترکیبی نیاز دارند.\n\n \n\n \n\nبه جای پلازمید بزرگ نوترکیب، از ناقل های کوچک استفاده می شود که سبب افزایش سرعت و راندمان انتقال می شود.\n\nمهمترین لازمه ها برای انتقال ژن  توسط آگروباکتریوم\n\nتولید استوسیرینگون یا دیگر ترکیبات مرتبط با آن توسط ریز نمونه گیاهی یا تحریک باکتری توسط استوسیرینگون مصنوعی جهت فعال شدن ژنهای ناحیه vir\n\n \n\n \n\nباززایی گیاهان کامل توسط سلول ها و بافت های مستعد برای ترانسفورماسیون\n\nروش های تلقیح\n\nآلوده سازی گیاهان زخمی\n\n \n\nکشت توام\n\n \n\nروش دیسکی برگی\n\n \n\nآلودگی ویروس با استفاده از آگروباکتریوم\n\nروش انتقالی توالی های ویروسی یا ویروئیدی به گیاهان به استفاده از آگروباکتریوم را Agroinfection یا Agroinoculation می نامند. امروزه مشخص شده که ژنوم های ویروسی گیاهی که در پلازمیدهای Ti کلون می شوند، می توانند از آگروباکتریوم به گیاه منتقل شوند و پس از انتقال، یک آلودگی ایده آل ایجاد نمایند.\n\nبه دلیل اینکه بعضی از ویروس ها به صورت مکانیکی منتقل نمی شوند و از طرفی مایه زنی مصنوعی ویروس با واسطه حشره ناقل نیز با مشکلاتی از جمله عدم یکنواختی در مایه زنی همراه است از این رو از این روش به صورت گسترده ای استفاده می شود.\n\nاین روش برای انتقال ویروس های مختلفی مانند کالیموویروسها، بادنا ویروسها، جمینی ویروسها و لتئوویروسها که محدود به آوند های آبکشی گیاهان هستند و ویروئیدها به کار رفته است.\n\nمزایا\n\nیک ابزار طبیعی برای انتقال ژن ها\n\nتوانایی آلوده سازی سلول ها و بافت های سالم و کمتر شدن مشکلات ناشی از محدودیت های کشت بافت\n\nانتقال قطعات بزرگ  DNAبا کارآیی زیاد\n\nتلفیق DNA فرآیند دقیق\n\nپایداری بالای ژن منتقل شده\n\nمعایب\n\n \n\nمحدودیت در دامنه میزبانی\n\n \n\nمشکل بودن تراریخت نمودن سلول ها در بافت هایی که از توانایی باززایی برخوردارند\n\nمنابع\n\nBoultan, M.I. (1995). Agrobacterium mediated transfer of gminiviruses to plant tissues. Meth. Mol. Biol. 99: 77-93.\n\n \n\n \n\nChawla, H.S. 2000. introduction to Plant Biotechnology. Science Publisher, Inc. USA. 368pps.\n\n \n\nMartin, J. H., Mifsud, D. & Rapisarda, C. (2000). The whiteflies (Hemiptera : Aleyrodidae) of Europe and the Mediterranean Basin. Bull. Entom. Res 90: 407-448.\n\n \n\nPico, B., Ferriol, M., Diez, M. J. & Vinals, F. N. (2001). Agroinoculation methods to screen wild Lycopersicon for resistance to Tomato yellow leaf curl virus. J. Plant Pathol. 83, 215-220.\n\n \n\nRigden, J.E., Dry, I.B., Kruke, L.R. and Rezaian, M.A. (1996). Plant virus DNA replication processes in agrobacterium: insight into the origins on geminiviruses. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93: 10280-10284.\n\n \n\n \n\n \n\n \n\n۳۰ تا ۷۰ درصد پروژه / پاورپوینت / پاور پوینت / سمینار / طرح های کار افرینی / طرح توجیهی /  پایان نامه/  مقاله ( کتاب ) های اماده   به صورت رایگان میباشد