دانلود پاورپوینت آشنایی با اسپکتروفتومتر در بیوشیمی و نحوه کارکرد آنه

\n

عنوان قبلی : اسپکتروفتومتر در بیوشیمی

\n

\n

عنوان های پاورپوینت  : 

\n

\n

آشنایی با اسپکتروفتومتر در بیوشیمی

\n

و نحوه کارکرد آنها

\n

\n

کاربرد اسپکترو فتو متری در بیو شیمی

\n

\n

اندازه گیری غلظت یک محلول

\n

\n

\n

قانون بیر لامبرت

\n

نحوه درجه بندی دستگاه اسپکتروفوتومتر

\n

روش کار و اندازه گیری جذب یک محلول

\n

انتخاب طول موج مناسب جهت اندازه گیری جذب

\n

\n

سایر اصطلاحات در اسپکتروفتومتری

\n

آزمایش شماره 1:اندازه گیری گلوگز خونGlucose

\n

\n

آزمایش قندها یا گلوسیدها

\n

\n

\n

هدف آزمایش: اندازه گیری گلوکز خون

\n

اساس آزمایش: روش گلوکز اکسیداز ( GOD ) پاراآمینوفنازن ( PAP )

\n

\n

گلوکزاوری

\n \n\n \n\n

---

\n\nقسمت ها و تکه های اتفاقی از فایل\n\n \n\nاسپکتروفتومتر در بیوشیمی\n\n \n\nکاربرد اسپکترو فتو متری در بیو شیمی\n\nاسپکتروفتومتری\n\nبوسیله اسپکتروفتومتر شدت رنگ محلولها را با دقت اندازه گیری می کنند.\n\nدستگاههائی که برای رنگ سنجی به کار برده می شوند الکتروفتومترو یا اسپکتروفتومتر نامیده می شوند.\n\nاکثریت قریب به اتفاق سنجش های بیوشیمیایی به روش های کالریمتری و یا اسپکتوفتومتری انجام می پذیرد،که بر اساس ارتباط بین شدت جذب نور (absorbance) و یا عبور نور (transmittance) توسط غلظت های مختلف از ماده مورد نظر،بنا شده است.\n\n \n\nبطور کلی هر اسپکتروفتومتر:\n\nیک منبع نورانی،\n\nیک وسیله ایجاد نور تکرنگ با طول موج مشخص\n\nیک سلول یا لوله مخصوص برای جادادن محلول رنگی\n\n، یک سلول فتوالکتریک و یک گالوانومتر دارد.\n\nاندازه گیری غلظت یک محلول\n\nبه دو روش می توان غلظت یک محلول را اندازه گیری کرد:\n\nالف) از راه اندازه گیری نوری که از محلول رنگی خارج می شود و\n\nبه آن ،Transmitance   ،یا عبور می گویند؛\n\nب) اندازه گیری مقدار نوری که جذب محلول رنگی می شود و به آن دانسیته اپتیک   (OPTICAL DENSITY) O.D یا آبسوربنس می گویند.\n\n \n\n \n\n \n\n \n\n \n\n \n\n \n\n \n\n \n\n \n\n \n\n \n\nالف) دانسیته اپتیک یا آبسوربنس\n\nنوری که از یک محلول رنگی عبور می کند مقداری از آن جذب محلول رنگی می شود .\n\nاگر Io شدت نور اولیه و I شدت نور خارج شده از محلول باشد بنابراین  I a شدت نوری است که جذب محلول رنگی گردیده است.\n\nIa                                     = I  - Io\n\nLog Io   - log I =OD = Absorbanc\n\nlogI/I0=OD\n\n \n\n \n\n \n\n(۱)         log I0/I=OD\n\n \n\n \n\n \n\nجذب از دو قانون پیروی می کند:\n\nمطابق قانون بیرولامبرت (BEER & LAMBERT) هنگامیکه نور یک رنگ از محلول رنگی عبور میکند مقدار نوری که به وسیله محلول جذب می شود ویا مقدار نوری که از محلول خارج می شود؛\n\nبه غلظت ماده رنگی موجود در محلول\n\nبه ضخامت لوله ایکه نور از آن عبور کرده بستگی دارد.یعنی:\n\nOD=KCL                              = جذ ب\n\n \n\nقانون بیر لامبرت\n\n \n\nlogIo/I= KCL\n\nکه در آن K  ضریب جذب ماده مورد آزمایش، C  غلظت جسم مورد آزمایش و L قطر لوله می باشد و چون معمولاً قطر لوله را مساوی یک سانتی متر اختیار میکنند بنابراین خواهیم داشت:    OD= log I0/I=KC\n\nK یا ضریب جذب ماده برای مواد مختلف فرق می کند و به آسانی قابل اندازه گیری است.\n\n \n\n \n\nنحوه درجه بندی دستگاه اسپکتروفوتومتر\n\nروی صفحه مدرج دستگاه در قسمت بالا درصد نور عبور کرده یا ترانسمیتانس\n\nدر قسمت پائین درست در مقابل درجات ترانسمیتانس OD،یا ابز ربنس قرار می هند.\n\n، درجات میزان عبور همه با هم مساوی است.\n\nدرجات O D به علت لگاریتمی بودن نامساوی هستند.\n\nروش کار و اندازه گیری جذب یک محلول\n\nآزمایش ۱ – بهترین طول موج برای اندازه گیری غلظت یک محلول رنگی چیست؟\n\nمی دانید که از تجزیه نور سفید نورهای مختلف رنگی حاصل می شود که در قسمت مرئی دارای طول موجهای زیر می باشد.\n\n \n\nبنفش ۴۲۰-۴۳۰، آبی۴۷۰-۴۹۰،   سبز520-550 ، زرد580\n\n \n\n \n\n \n\n \n\nانتخاب طول موج مناسب جهت اندازه گیری جذب\n\nمحلول مورد آزمایش رادرمعرض تابش نورهایی با طول موجهای مختلف قرارداده OD های قرائت شده  را یادداشت می کنیم.\n\nنمودار جذب برحسب طول موج را رسم می کنیم.\n\nطول موج منا سب ،طول موجی است که ماکز یمم جذب را دارد.\n\n \n\n \n\nدو نکته: عملی\n\n۱ – در قرائت OD نتایج، زمانی قابل اطمینان است که:\n\n۰.۷ < OD <0.1\n\nبنابر این غلظت مجهول اگر زیاد باشد باید آنرا با حلال مربوطه طوری رقیق نمود که OD آن در حدود بیان شده قرار گیرد.\n\nدر این صورت ضریب رقت را باید در محاسبه منظور نمود.\n\n \n\n۲ – اگر قرائت OD چندین مجهول پشت سر هم بخواهد  انجام گیرد در فواصل قرائت باید دستگاه را با شاهد (BLANK) روی صفر OD تنظیم نمود.\n\n \n\n \n\nسایر اصطلاحات در اسپکتروفتومتری\n\nمعرفها\n\nموادی هستند که حداکثر میزان ناخالصی مواد شیمیایی را مشخص می کنند.\n\nمحلولهای استاندارد\n\nاداره ملی استاندارد  از طریق دفتر مواد مرجع استاندارد،کالج  پاتولوژیستهای آمریکا وکمیته استانداردهای\n\nآزمایشگاههای  بالینی ،استانداردهای آزمایشگاهای بالینی مواد شیمیایی را تعیین می کند واین محلولها دارای مقدار\n\nنرمال از مواد شیمیایی هستند.\n\nبلانک\n\nلوله شاهد است وهمیشه مقدار آن در اسپکتروفوتومتر صفر است.\n\n \n\nآزمایش شماره ۱:اندازه گیری گلوگز خونGlucose\n\n \n\nمعمولا گلوکز خون به صورت ناشتا در سرم خون وریدی اندازه گیری می شود روش های متعددی برای اندازه گیری گلوکز وجود دارد. این روش ها به دو روش کلی شیمیایی و کیت های آنزیمی تقسیم می شوند مهمترین روش شیمیایی  اندازه گیری گلوکز روش ارتو تولو ئیدین است. اندازه گیری گلوکز به دو روش آنزیمی دقیق تر واختصاصی تر است .در روش های آنزیمی اثر عوامل مداخله کننده در آزمایش به حداقل می رسد . سه روش آنزیمی برای اندازه گیری گلوکز طراحی شده است که عبارتند از :\n\n۱- روش گلوکز اکسیداز(GOD)     2- روش گلوکز دهیدروژناز  3- روش هگزوکیناز\n\n \n\nآزمایش قندها یا گلوسیدها\n\n \n\nقندها یا ساکاریدها را به سه دسته تقسیم می کنند:\n\nدسته اول – منوساکاریدها\n\nپلی الکلهای ۳ تا ۷ کربنی هستند که یکی از عاملهای الکلی به عامل کربنیل تبدیل شده است و به ترتیب آنها را تریوز – تتروز- پنتوز- هگزوز- هپتوز می نامند.\n\n \n\nمنوساکاریدها ممکن است دارای عامل آلدئیدی یا ستنی باشند که در حالت اول آلدوز و در حالت دوم ستوز نامیده می شوند.\n\nمهمترین پنتوزها: آرابینوز – گزیلوز – ریبوز و…\n\nمهمترین هگزوزها: گلوکز-مانوز-گلاکتوز-فروکتوز … می باشند.\n\n \n\n \n\n \n\nدسته دوم – الیگوساکاریدها\n\nاز الیگو ساکاریدها، دی ساکاریدها دارای اهمیت بیشتری هستند.\n\nبعضی از دی ساکاریدها دارای خاصیت احیاکنندگی می باشند مانند: مالتوز و لاکتوز.\n\nبرخی دیگر دارای خاصیت احیاء کنندگی نیستند. مانند ساکارز یا سوکروز.\n\n \n\n \n\nدسته سوم – پلی ساکاریدها\n\nمهمترین پلی ساکاریدها شامل نشاسته، سلولز و گلیکوژن می باشد.\n\n \n\n \n\n \n\nهدف آزمایش: اندازه گیری گلوکز خون\n\nاساس آزمایش: روش گلوکز اکسیداز ( GOD ) پاراآمینوفنازن ( PAP )\n\nآنزیم گلوکز اکسیداز باعث اکسیداسیون گلوکز وتولید  H2O2 یا آب اکسیژنه می شود که در حضور این آنزیم پارا آمینوفنازن و فنل کمپلکس صورتی رنگی ایجاد می کند که در طول موج 500 نانومتر جذب دارد شدت رنگ حاصل ومیزان جذب با مقدار گلوکز نمونه رابطه مستقیم دارد.\n\n \n\n \n\nوسایل مورد نیاز برای آزمایشاندازه گیری گلوکز خون :\n\n \n\n۱ – لوله آزمایش\n\n۲ – معرف شماره 1\n\n۳ – معرف شماره 2 ( محلول استاندارد گلوکز )\n\n۴ -  سمپلر 10 میکرولیتری یا λ50 وλ1000\n\n۵ – نمونه سرم\n\n۶ – سر سمپلر\n\n۷ – بن ماری\n\n۸ – اسپکتروفوتومتر\n\n \n\n \n\nروش انجام آزمایش :\n\nسه لوله آزمایش برداشتیم سپس روی لوله اول تست وروی لوله دوم استاندارد و روی لوله سوم بلانک نوشتیم سپس درون هر سه لوله یک میلی لیتر از معرف شماره ۱ ریختیم سپس ده میکرولیتر معرف شماره ۲ به لوله استاندارد اضافه کردیم سپس ده میکرولیتر از نمونه سرم به لوله تست اضافه کردیم بعد از این مراحل سه لوله را ۱۵ دقیقه دربن ماری ۳۷ درجه سانتیگراد قرار دادیم سپس توسط اسپکتروفوتومتر جذب آنها را در طول موج  nm500 قرائت کردیم وسپس غلظت گلوکز نمونه را توسط فرمول زیر محاسبه کردیم.\n\n \n\nمحاسبه:\n\nغلظت گلوکز سرم\n\n \n\nمقادیر طبیعی:۱۱۰-۷۰میلی گرم درصد\n\n \n\nتفسیر: این فرد دارای میزان نرمال گلوگز میباشد.\n\nگلوکزاوری\n\n \n\nگلوکز اوری glucosuria یعنی وجود گلوکز در ادرار .\n\n \n\nگلیکوز اوری glycosuria یعنی وجود هر نوع قندی .\n\n \n\nجواب مثبت کاذب ممکن است در بیمارانیکه سالیسیلات، مورفین و بعضی از                  داروهای دیگر خورده اند، دیده شود.\n\n \n\nبه طور معمول یک انسان سالم حداکثر یک گرم گلوکز از راه ادرار دفع مینماید\n\nدرگلوکزاوری مقداری گلوکز  دفع شده از این مقدار بیشتر است.\n\n \n\nگاهی گلوکز به طور اتفاقی از ادرار دفع می شود که در حالات، هیجان، شوک، تحریک، ورزشکاران در ورزش های سنگین،\n\n۱۵ درصد از بیمارانی که گلوکز در ادرار دارند، مربوط به بیماری قند نیست.\n\n \n\n \n\n \n\nجستجوی گلوکز در ادرار\n\n \n\nطریقه آزمایش:\n\n۵ میلی لیتر معرف بندیکت در لوله آزمایش ریخته و روی آن ۸ تا ۱۰ قطره ادراربریزید.\n\n۱-۲ دقیقه روی شعله نگاه دارید..\n\nاگر گلوکز در ادرار زیاد باشد تمام محتوی لوله زرد آجری شده و رسوب می کند ، اگر مقدار آن متوسط باشد دارای رسوب و رنگ آن کاملاً آجری می شود .\n\nاگر مقدار آن کم باشد، زرد مایل به سبز می شود\n\n \n\n۳۰ تا ۷۰ درصد پروژه / پاورپوینت / پاور پوینت / سمینار / طرح های کار افرینی / طرح توجیهی /  پایان نامه/  مقاله ( کتاب ) های اماده   به صورت رایگان میباشد