دانلود پاورپوینت آشنایی با ساز و کار (برنامه) واکنش PCR

\n

واکنش زنجیره ای پلی مراز

\n

\n

عنوان های پاورپوینت  : 

\n

\n

آشنایی با ساز و کار (برنامه) واکنش PCR

\n

واکنش زنجیره ای پلی مراز

\n

استخراج ماده ژنتیکی

\n

PCR یا واکنش زنجیره ای پلیمراز (Polymerase Chain Reaction)

\n

ساز و کار (برنامه) واکنش PCR

\n

DNA IN THE CELL

\n

DNA STRUCTURE DEOXRIBO NUCLEIC ACID

\n

DNA STRUCTURE

\n

(POLYMERASE CHAIN REACTION  (PCR

\n

اجزا واکنش PCR

\n

نمونه DNA (الگو)

\n

آنزیم Taq polymerase

\n

نوکلئوتید ها

\n

بافر

\n

یون منیزیم

\n

پرایمرها

\n

وسایل مورد نیاز برای واکنش PCR

\n

نکاتی در رابطه با تهیه واکنش PCR

\n

 PCR PROCESS

\n

نکاتی در رابطه با مشاهده باند غیر اختصاصی

\n

انواع روشهای PCR

\n

آرتی - پی‌سی آر (‏RT-PCR‏)

\n

آرمز پی‌سی‌آر (‏ARMS-PCR‏)

\n

نستد پی‌سی‌آر (‏Nested-PCR‏)

\n

ELECTROPHORESIS

\n

الکتروفورز

\n

\n \n\n \n\n

---

\n\nقسمت ها و تکه های اتفاقی از فایل\n\n \n\nپرایمرها\n\nغلظت بهینه پرایمرها برای واکنش PCR از 100 نانو مولار تا یک میکرو مولار متغییر است. غلظت بیش از این، منجر به تولید قطعات غیر اختصاصی می شود.\n\nطول معمول پرایمرها : 18-24 باز باشد.\n\nTM بین 52 تا 65 درجه سانتی گراد مناسب است .\n\nتفاوت TM پرایمرها حداکثر 5 درجه سانتی گراد باشد .\n\nبهتر است آغاز و انتهای پرایمر با یک یا دو باز پورین آغاز و خاتمه یابد .\n\nپرایمر ها Blast شوند .(جلوگیری از دایمر)(بررسی اختصاصیت)\n\nفرمول محاسبه TM:\n\nTM=(A+T)*2+(G+C)*4\n\nبهترین دمای انلینگ 3-5 درجه کمتر از TM است .\n\nوسایل مورد نیاز برای واکنش PCR\n\nحداقل وسایل مورد نیاز برای انجام واکنش PCR:\n\nدستگاه ترموسایکلر\n\nمیکرو پیپت\n\nظرف یخ\n\nوسایل یکبار مصرفی :\n\nمانند تیپ ، ویال و ظروف نگهداری آنها می باشد .\n\nنکاتی در رابطه با تهیه واکنش PCR\n\nنگهداشتن ویال بر روی یخ در طول زمان افزودن اجزاء واکنش و مخلوط کردن آنها.\n\nتهیه واکنش در زیر جریان هوای یک هود لامینار استریل (درمواردی که در محل آزمایشگاه ازنوع DNA الگوی مورد نظر کار ما زیاد استفاده می شود)\n\nبهتر است ابتدا آب واکنش در ویال کوچک ریخته شود.\n\nبه حداقل رساندن شانس اتصال پرایمر به DNA (ترجیحاً DNA الگو آخرین افزودنی قبل از آنزیم باشد)\n\nافزودن آنزیم پلیمراز به عنوان آخرین ماده واکنش.\n\nنکاتی در رابطه با مشاهده باند غیر اختصاصی\n\nغلظت پرایمر خیلی زیاد است.\n\nدمای Annealing پائین است خصوصاً در سیکل‌های اول دمای پائین Annealing سبب اتصال غیر اختصاصی پرایمر به الگو می‌گردد.\n\nمی توان غلظت یون منیزیم را کاهش داد\n\nغلظت dNTP خیلی بالا است.\n\nدناتوراسیون DNA الگو بطور کامل نیست.\n\nزمان سیکل‌ها را می‌توان کمی کاهش داد.\n\nسرعت RAMP خیلی کند است.\n\nگاهی انجام یک واکنش NESTED PCR باند اضافی را حذف می‌کند.\n\nبریدن باند مورد نظر از روی ژل آگارز، تخلیص آن و سپس Reamplify آن نیز توصیه می‌گردد.\n\nدر طراحی پرایمر اشکال بوده است\n\nانواع روشهای PCR\n\nمالتیپلکس پی سی آر (‏(Multiplex-PCR‏ :\n\n- یکی از روش‌های تغییریافته ‏PCR‏ است که در آن  با استفاده از پرایمرهای مختلف می‌توان چندین جایگاه را مورد بررسی قرار داد و از چندین جفت پرایمر اختصاصی جهت تکثیر استفاده می‌شود. کاربردهای این روش می‌تواند شامل موارد زیر باشد:\n\n‏1) بخش‌های بزرگی از یک ‏DNA‏ (هدف)، جهت جست‌وجوی تغییرات می‌تواند بررسی شود.\n\n‏2) بخش‌های غیرمربوط به هم در ژنوم هدف می‌تواند مورد آزمایش واقع شود.\n\n‏3) می‌توان از طریق این روش با پرایمرهای مختلف به جست‌وجوی عوامل مختلف پرداخت، مانند شناسایی عوامل شایع مننژیت. این روش بیشتر برای شناسایی جایگاههایی از ژن‌ها به کار می‌رود که انواع زیادی از جهش در آنها به وقوع می‌پیوندد.‏\n\nآرتی - پی‌سی آر (‏RT-PCR‏)\n\nبه خاطر اینکه آنزیم DNA پلی مراز به DNA دو رشت ای برای رونوشت برداری نیاز دارد، لذا بایستی ابتدا RNA را به cDNA(complementary DNA) DNA- مکمل- تبدیل کنیم .\n\nاین روش به ‏PCR‏ نسخهبرداری معکوس نیز معروف است که ماده اولیه در آن ‏RNA‏ است. اولین مرحله در این روش تبدیل ‏RNA‏ به ‏cDNA‏ توسط آنزیم نسخهبردار معکوس صورت می‌گیرد (‏RT‏).\n\nبرخی از موجودات مانند برخی از ویروس‌های ‏RNAدار، ژنومشان تنها از ‏RNA‏ ساخته شده است.\n\nکاربرد این آنزیم بهدلیل آن‌که آنزیم به حرارت حساس بود در ابتدا پایین بود ولی با کشف باکتری به نام "ترموس ترموفیلوس" یک ‏DNA‏ پلیمراز مقاوم به نام (‏Tth‏) بهبود یافت که در حضور یون ‏Mn+2‎‏ دارای فعالیت نسخهبرداری معکوس است و در دمای 72 درجه سانتیگراد توسط این آنزیم از روی ‏RNA، ‏DNA‏ ساخته می‌شود و سپس ‏Mn+2‎‏ اضافی توسط اتیلن گلیکول تترااستیک اسدی (‏EGTA‏) حذف می‌شود و سپس این آنزیم از ‏DNAای که خود ساخته استفاده و آن را تکثیر می‌کند.‏\n\nآرمز پی‌سی‌آر (‏ARMS-PCR‏)\n\n‏- این روش تکثیری قدرتمند برای مشخص کردن جهش‌های نقطهای است.\n\nدر این روش از پرایمرهای جهش یافته و طبیعی در دو لوله جداگانه استفاده می‌شود.\n\nاگر عمل پلیمریزاسیون در لوله حاوی پرایمر طبیعی انجام شود، نشان‌دهنده نبود جهش نقطهای در باز مورد نظر است و اگر عمل پلیمریزاسیون در لوله حاوی پرایمر جهش یافته انجام شود، نشان‌دهنده حضور جهش نقطهای در باز مورد نظر است.\n\nنستد پی‌سی‌آر (‏Nested-PCR‏)\n\nدر این روش از دو جفت پرایمر استفاده می‌شود، طوری که جفت دوم در بین جفت اول جای می‌گیرد.\n\nدر این روش ابتدا پرایمر بیرونی توالی هدف در طول 30-15 چرخه تکثیر می‌شود، سپس محصول ‏PCR‏ حاصل به لولهای دیگر منتقل می‌شود و بهعنوان الگو و با استفاده از جفت پرایمر داخلی مرحله دوم ‏PCR‏ انجام شده و ترادف کوچکتری از ‏DNA‏ که درون ‏PCR‏ اولی است، به اندازه 40-15 چرخه تکثیر می‌شود.‏\n\nمزایای این روش تغییر یافته ‏PCR‏ عبارت است از:\n\nنیاز به تأییدهای بعدی کمتر است.\n\nحساسیت در این روش به میزان زیادی بالاتر است .\n\nبه دلیل انتقال محصول ‏PCR‏ دور اول به لوله جدید، ممانعت کنندهها رقیق می‌شود.\n\nاین روش در تعیین جنسیت جنین در سه ماهه اول بارداری استفاده شده و از این طریق توانستهاند بیماری‌های وابسته به جنس را تعیین کرده و از تولد کودکان بیمار جلوگیری کنند.‏همچنین ویروس "سیتومگالوویدوس" که می‌تواند سبب ناشنوایی در 1% از کودکان شود، توسط این روش تشخیص داده شده و امکان درمان زودهنگام از این طریق امکان‌پذیر است. جنین‌های مبتلا به سندروم داون نیز در مرحله بارداری مادر با این روش تشخیص داده شدند.\n\n \n\n \n\n30 تا 70 درصد پروژه | پاورپوینت | سمینار | طرح های کارآفرینی و  توجیهی |  پایان-نامه |  پی دی اف  مقاله ( کتاب ) | نقشه | پلان طراحی |  های آماده به صورت رایگان میباشد ( word | pdf | docx | doc )